One-step RT-qPCR TAKARA

Mô tả

One-step RT-qPCR TAKARA

Hãng: Takara Bio

Ở Takara Bio, những Enzyme tuyệt vời là một phần DNA của chúng tôi. Nhờ hơn 90 năm kinh nghiệm trong việc theo đuổi sự xuất sắc trong công nghệ sinh hóa và sinh học phân tử, chúng tôi đã phát triển một danh mục lớn các công cụ đã được công bố rộng rãi trong các nghiên cứu đánh giá ngang hàng. Khám phá bên dưới để xem làm thế nào chúng tôi có thể giải quyết các thách thức của bạn với one-step PCR định lượng phiên mã ngược (RT-qPCR).

ƯU ĐIỂM CỦA ONE-STEP RT-qPCR

• Quy trình làm việc đơn giản và nhanh chóng
• Tương thích với số lượng lớn mẫu (khi nhìn vào một vài gen mục tiêu)
• Thích ứng với quy trình công việc tự động / thông lượng cao

HẠN CHẾ

• Không thể tối ưu hóa bước sao chép ngược (RT)
• Không tạo thư viện cDNA để lưu trữ
• Không lý tưởng khi phân tích số lượng lớn gen mục tiêu

GIỚI THIỆU

PCR định lượng (qPCR) là một kỹ thuật mạnh mẽ để phân tích chính xác biểu hiện gen. Khi bắt đầu với các mẫu RNA, trước tiên người ta phải thực hiện bước sao chép ngược (RT) để tạo cDNA cho phản ứng qPCR tiếp theo. One-step RT-qPCR hợp lý hóa quy trình công việc này bằng cách thực hiện bước RT trong cùng một ống với phản ứng qPCR (Hình 1).

Hình 1. Sơ đồ của phản ứng one-step RT-qPCR

Nói chung, RT-qPCR một bước phù hợp nhất cho các ứng dụng yêu cầu tốc độ và thông lượng. Vì giao thức ống đơn dễ cài đặt và tương thích với các trình xử lý chất lỏng và / hoặc hệ thống tự động, nó cho phép ít thời gian thực hiện hơn, giảm các lỗi đường ống và giảm thiểu ô nhiễm. RT-qPCR một bước được áp dụng tốt nhất cho quy trình công việc bao gồm nhiều mẫu có ít gen mục tiêu.

Tuy nhiên, one-step RT-qPCR có một số hạn chế. Vì cả hai bước RT và qPCR diễn ra trong cùng một ống, điều kiện phản ứng không thể được tối ưu hóa một cách riêng biệt, điều này có thể dẫn đến năng suất và / hoặc hiệu quả thấp hơn trong cả hai bước. Một hạn chế khác là tất cả các cDNA được tạo ra được sử dụng hết trong bước qPCR tiếp theo, có nghĩa là không có thư viện nào của cDNA có thể được đánh dấu để xác nhận hoặc thử nghiệm thêm.

Chúng tôi cung cấp bộ kit one-step RT-qPCR hỗ trợ sử dụng TB Green (thuốc nhuộm DNA xen kẽ xanh độc quyền của chúng tôi) và các hóa chất dựa trên đầu dò (probe) để đáp ứng nhu cầu thử nghiệm của bạn và cho phép bạn linh hoạt chạy nhiều ứng dụng.

Nguyên tắc của one-step RT-qPCR

Bộ kit one step PrimeScript III RT-qPCR của Takara Bio cho phép tổng hợp cDNA từ RNA bằng cách sử dụng PrimeScript Reverse Transcriptase, sau đó là khuếch đại PCR với Phiên bản Hotstart của Takara Ex Taq trong một quy trình duy nhất, không bị gián đoạn. Các sản phẩm khuếch đại PCR được phát hiện và theo dõi trong thời gian thực với phát hiện dựa trên đầu dò (probe) hoặc TB Green.

Hình 2. Sơ đồ quy trình làm việc bằng cách sử dụng PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.

Công nghệ phát hiện dựa trên đầu dò (Probe) của one-step RT-qPCR

Bộ kit one-step RT-qPCR sử dụng phát hiện dựa trên đầu dò phải chính xác, cụ thể và có thể tái tạo. Bộ công cụ RT-PCR One Step của chúng tôi (Perfect Real time PCR) vượt qua các yêu cầu này với màu sắc bay. Bộ Kit này có sẵn đóng gói 100 và 500 phản ứng.

Hình 3. Sơ đồ chi tiết phát hiện và định lượng huỳnh quang RT-PCR dựa trên đầu dò

Công nghệ phát hiện dựa trên màu huỳnh quang TB-Green của one-step RT-qPCR

Bộ kit one-step RT-qPCR sử dụng phát hiện dựa trên TB Green rất nhanh, hiệu quả và nhạy cảm. Khi bạn muốn có kết quả nhanh chóng và hiệu quả về chi phí trong quy trình một ống, hãy sử dụng bộ kit one-step PrimeScript RT-PCR II của chúng tôi (Perfect Real Time PCR). Bộ Kit này có sẵn đóng gói 100 và 500 phản ứng.

Phương pháp này phát hiện huỳnh quang được tạo ra trong quá trình khuếch đại bằng cách thêm thuốc nhuộm xen kẽ DNA (TB Green) phát huỳnh quang khi liên kết với DNA sợi kép. Sau quá trình tổng hợp và liên kết TB Green với DNA được tổng hợp trong RT-PCR, có thể đo được số lượng DNA khuếch đại và điểm nóng chảy của khuếch đại kết quả.

Hình 4. Sơ đồ chi tiết phát hiện và định lượng TB huỳnh quang RT-PCR dựa trên màu TB-Green

Lựa chọn PrimeScript kit phù hợp cho real time RT-PCR

Trích dẫn nổi bật

Dưới đây là một vài ví dụ về nghiên cứu được thúc đẩy bởi bộ dụng cụ one-step RT-qPCR của chúng tôi:

Ma, W. et al. Zika virus causes testis damage and leads to male infertility in mice. Cell 167, 1511–1524.e10 (2016).

Cat. # RR064A was used to sensitively detect Zika viral RNA levels from multiple tissues in Zika virus-infected mice. These data were able to discern higher viral levels in testis, associated with infertility.

Xie, Y., Wang, M., Xu, D., Li, R. & Zhou, G. Simultaneous detection and identification of four sugarcane viruses by one-step RT-PCR. J. Virol. Methods 162, 64–68 (2009).

Cat. # RR064A was used in the development of a one-step quadruplex RT-PCR method for detecting viruses in sugarcane. This rapid and sensitive technique greatly reduced cost and labor since multiple infections could be tested for in one sample.

Zhang, N. et al. Development of one-step SYBR Green real-time RT-PCR for quantifying bovine viral diarrhea virus type-1 and its comparison with conventional RT-PCR. Virol. J. 8, 374 (2011).

Cat. # RR086A was used to develop a specific, sensitive, and reproducible assay for bovine viral diarrhea virus, a surrogate model for hepatitis C virus. The assay was 10-fold more sensitive than conventional assays and showed no primer dimers or nonspecific products.

Zou, Q. et al. Use of Praziquantel as an adjuvant enhances protection and Tc-17 responses to killed H5N1 virus vaccine in mice. PLoS One 7, e34865 (2012).

Cat. # RR086A was used to measure H5N1 infection levels in mouse lung tissue. This enabled the testing of a novel adjuvant, PZQ, which was able to reduce virus loads and prolong survival.

Thông tin bổ sung