Lựa chọn pha động cho sắc ký pha đảo

1/ Lựa chọn pha động cho sắc ký pha đảo

Thông qua kiểm soát độ pH của pha động, dung dịch đệm sẽ kiểm soát việc lưu giữ chất phân tích và cải thiện hình dạng peak. Dung dịch đệm thực sự phải có khả năng chống lại sự thay đổi pH khi mẫu được đưa vào ở pH khác và khả năng đệm đó chỉ đạt 100% ở giá trị pK của acid hoặc base.

Ở pH 4, phosphate là chất đệm kém và sẽ nhanh chóng chuyển về một trong các giá trị pKa của nó nếu đưa mẫu có tính acid hoặc base cao hơn vào. Theo nguyên tắc chung, người ta nên làm việc trong phạm vi ±1 đơn vị pH của giá trị pKa đệm để có thể kiểm soát tốt pH của pha động. Nồng độ đệm thích hợp cho HPLC có xu hướng ở mức 10-100 mM tùy thuộc vào kích thước và tính chất của mẫu, cũng như vật liệu nhồi cột. Các pha tĩnh gắn trên nền silica có độ tinh khiết cao với liên kết chắc chắn như dòng Hypersil GOLD, thường tương thích với loại đệm loãng tốt hơn so với các loại pha tĩnh truyền thống.

• Khi muốn kiểm soát ở vùng pH thấp (2-3), phosphate hoặc acid hữu cơ mạnh hơn như TFA hoặc acid formic thường được sử dụng.
• Nếu muốn kiểm soát ở vùng pH 4-5, nên xem xét sử dụng đệm acid hữu cơ như acetate hoặc citrate thay cho photsphate.

2/ Kết luận

Ngay cả những thay đổi nhỏ về pH, thậm chí từ sai số đo, các vấn đề khi phối trộn các thành phần trên bơm hoặc sự hấp phụ nước trong khí quyển vào pha động, đều có thể làm thay đổi phương pháp nếu không được đệm đúng cách. Cần thận trọng khi lựa chọn hỗn hợp đệm và dung môi hữu cơ để đảm bảo rằng hỗn hợp của cả hai không tạo ra muối rắn có thể gây tắc nghẽn và ô nhiễm hệ thống.